貨號	產品名稱	目錄價（元）
fy200006	人間充質干細胞 成骨 誘導試劑盒	1080

 

貨號	產品名稱	目錄價（元）
fy200007	人間充質干細胞 成脂 誘導試劑盒	1380

 

貨號	產品名稱	目錄價（元）
fy200008	人間充質干細胞 成軟骨 誘導試劑盒	1780

產品特點：

小包裝

，采用100 ml裝，使用更節約、更方便；

簡約裝

，升級產品、組成更簡潔、操作更方便；

更穩定，

產品系統誤差更小，使用更穩定。

適用細胞類型：

人源間充質干細胞，組織來源包括

骨髓、脂肪、臍帶、羊膜、皮膚、牙髓、臍帶血、外周血

等。
 

人間充質干細胞成脂誘導試劑盒

僅用于科學研究

產品信息

產品名稱：人間充質干細胞成脂誘導試劑盒
貨號：fy200007
批號：見包裝
存儲與有效期：
組分a、d、e于2-8 ℃避光保存，組分b、c于-20 ℃避光保存。所有組分均須避免反復凍融及復溫，各組分在所需要的溫度下有效期為1年，配制完成的完全培養基于2-8 ℃保存，有效期1個月。
適用細胞：
人骨髓間充質干細胞、人脂肪間充質干細胞、人臍帶間充質干細胞、人羊膜間充質干細胞、人牙髓間充質干細胞、人臍帶血間充質干細胞，其他組織來源的人間充質干細胞。

產品介紹

間充質干細胞（msc）具有多向分化的潛能，體外在一定條件下可以誘導分化為脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞。2006年國際細胞治療協會（isct）確定此三項檢測指標是msc鑒定的必檢項目，目前以msc為基礎的研究報道均會對該三個指標進行鑒定。在多種組織來源和制作方法的msc藥品質量控制中，成骨、成脂、成軟骨也是必檢指標。
為滿足科研和制藥對msc分化能力的鑒定，弗元生物結合多年msc研究經驗優化msc誘導試劑盒，在穩定性、易用性上大幅改進，采用了獨創的小包裝。該試劑盒的設計用途，首先，用于鑒定人msc是否具有成脂分化能力，滿足msc質量控制的要求。其次，誘導培養基還可用于研究誘導分化過程中的其他檢測，如mrna檢測、lncrna檢測、microrna檢測、蛋白表達檢測、油脂定量檢測、免疫組化檢測等。再者，該產品誘導msc分化為的脂肪細胞多為多泡脂肪細胞樣，當脂肪滴融合過大時容易脫壁，難見單泡脂肪細胞樣。用于脂肪研究可斟酌使用本產品。
本產品僅適用于科學研究。

操作方法

實驗準備

u 試劑配制：

誘導液

b

：

2-8℃過夜融化添加物b液，b液使用前須37℃復溫30分鐘，充分混勻。將基礎培養基a液平均分成2份，各45 ml，加入添加物b液配制成完全誘導培養基b，充分混勻。

誘導液

c

：

2-8℃過夜融化添加物c液，加入基礎培養基a液的另一份45 ml，配制成完全誘導培養基c，充分混勻。

注意：

添加物b液必須充分復溫，內容物充分解凍為透明無沉淀?；旌铣烧T導完全培養基后必須充分混勻，2-8 ℃保存。整個過程須確保無菌操作，各試劑開封前以75%酒精擦拭表面。

油紅

o

染液（工作液）：

取油紅o儲液，與蒸餾水以3：2的比例混合均勻，中性濾紙過濾，即配制成了油紅o染液（工作液）。
u 培養皿處理：
加適量包被溶液d液到培養器皿中，輕輕搖動使其覆蓋整個培養器皿底面，室溫靜置30-60分鐘。棄去溶液，室溫晾干。

注意：

包被液c使用前必須進行室溫復溫。建議使用六孔板，每孔加d液1 ml，使用其他培養器皿時需考慮實驗結果的穩定性。整個過程需在超凈工作臺中操作，避免污染。
u 自備試劑：
l  消化液（0.25%trypsin-0.04%edta或其他 ）
l  磷酸鹽緩沖液（dpbs）
l  msc完全培養基
l  4%中性多聚jiaquan溶液

注意：

若msc完全培養基不含血清，則需要準備胰酶抑制劑。msc消化極易過度，建議稀釋0.25%胰酶消化液一倍，且嚴格控制消化時間。

操作步驟

1.      準備所需誘導分化的msc，當細胞融合達85%左右時，用消化液消化細胞，并用msc完全培養基重懸。
2.      按照3×10⁴ cells/cm²的密度將細胞接種于已包被處理的六孔板中，每孔msc完全培養基2 ml，37℃、5%co₂培養箱中培養。

注意：

細胞密度為該試劑盒的標準密度，可根據實驗室情況進行調整，調整依據參照所檢測msc正常傳代的密度的2倍接種，培養24小時后添加誘導培養完全培養基；或接種密度低，待細胞生長至下一步要求的密度后進行誘導。
3.      當細胞融合達90%時，棄去培養上清，每孔添加誘導液b 2 ml/孔，37℃、5%co₂培養。

注意：

成脂誘導后細胞易脫壁，換液時完全培養基必須經室溫復溫30分鐘。添加培養基時動作要輕柔，沿培養器皿側壁緩緩加入，避免吹起細胞。細胞起始誘導融合度對誘導效果十分關鍵，必須確保細胞生長至足夠密時再進行誘導。
4.      誘導培養72 小時后棄去原培養上清，添加誘導液c 2 ml/孔，37℃、5%co₂繼續培養。
5.      繼續誘導培養24 小時后棄去原培養基，添加誘導液b 2 ml/孔，37℃、5%co₂繼續培養。
6.      重復步驟4、5約3-5次，待細胞內出現明顯脂滴時更換為誘導液c繼續培養。
7.       

注意：

一般在培養4天左右高倍鏡下能看到細胞漿內有較多數量的圓形亮泡，5-9天融合為較大的亮泡，這些結構圍繞在細胞核周圍，較大的與細胞核大小相當。狀態較好的細胞10天內可結束培養過程，若10天后仍未見脂滴結構，請注意分析操作步驟與其他原因。
8.      每2天更換新鮮誘導液c，繼續培養至脂滴足夠大時培養結束。

注意：

換液時誘導液必須經過復溫，否則影響誘導效果和可能導致細胞脫壁。根據實驗需要選擇培養結束時間，若成脂面積過大或脂滴過大導致連成片則不利于結果的呈現，建議提前終止。不同實驗室msc誘導時出現脂滴的時間不盡相同，若大面積出現脂滴較早，則可提前更換為誘導液c。
9.      誘導培養結束時，棄去培養上清，dpbs洗細胞兩次，4%中性多聚jiaquan溶液2 ml/孔室溫固定細胞20分鐘。

注意：

培養結束時或中途可以選擇其他檢測方法，如基因表達檢測等，若采用自己的檢測方法則后續方案需要自己擬定。
10.  棄去固定液，dpbs洗2次，加入油紅o染液（工作液）1 ml/孔染色15分鐘。

注意：

該步驟適用于鑒定成脂能力，若出現脂滴（脂肪細胞）則會呈現紅色著色。若需要得到美觀的圖片，則染色時間需自己掌握。
11.  棄去油紅o染液（工作液），dpbs洗3次。

注意：

染色后肉眼可見孔內明顯染紅。染色過程中一定要避免組織細胞被風干，風干會影響顯微觀察效果。
12.  顯微鏡下觀察并拍照。

注意：

拍照一般選用高倍鏡，請根據需要確認選擇。
13.  

結果判定：

按照程序操作完畢，低倍鏡下觀察可見大面積紅色著色點，20倍和40倍鏡下可觀察到紅色球形在細胞內的情況，此紅色著色球為脂滴，說明實驗所用的msc具有成脂能力。否則，所使用的msc無成脂能力。

注意：

該判定標準僅進行定性分析，若需要進行定量分析，需要自行制定方案。

產品使用效果圖：

  

1、成骨誘導，誘導第7天可見明顯鈣沉積出現、誘導10-14天基本達到足量的鈣結節；
2、成脂誘導，誘導3天便可見小脂肪滴出現，誘導7-12天可完成鑒定，滿足拍照需求；
3、成軟骨誘導，按照說明書操作，方法簡單，可進行切片染色和直接染色鑒定，建議使用切片染色。

特別提示：

該系列試劑盒適用于人間充質干細胞分化能力鑒定，提供染色試劑。若選用其他指標鑒定，如鈣含量、脂肪含量、基因表達量等，則需要自備相關試劑。
該系列產品是鑒定使用，若細胞不符合要求，則形成率可能會低、甚至不會出現預期結果。

弗元生物推出間充質干細胞鑒定相關產品系列，為間充質干細胞研究提供優質的產品與服務。

文獻引用：

xu y, jiang y, wang y, ren y, zhao z, wang t, li t. linc00473 regulated apoptosis, proliferation and migration but could not reverse cell cycle arrest of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by a high-dosage of dexamethasone. stem cell res. 2020 oct;48:101954. doi: 10.1016/j.scr.2020.101954. epub 2020 aug 11. pmid: 32829248.
呂云,王立生.誘導多能干細胞來源的間充質干細胞的生物學特性[j].中國實驗血液學雜志,2019,27(04):1253-1258.
張嬌;鄒翠云;張蓓;江福能;鐘惟德;朱建國. 一種可控永生化的逆轉錄病毒載體和人臍帶間充質干細胞及其構建方法[p]. 中國專利:cn201910267989.5,2019-04-03

弗元生物推出間充質干細胞鑒定相關產品系列，為間充質干細胞研究提供優質的產品與服務。

弗元生物，致力于打造具有國際影響力的生物醫學品牌。

弗元生物立足于生物科技蓬勃發展的上海，與張江藥谷、中科院、三甲醫院等生物醫學領域的各企事業單位協作緊密，共同為中國生物醫學研究貢獻力量。公司以干細胞與再生醫學研究為核心，業務經營范圍輻射到細胞生物學、分子生物學、免疫學等生物醫學領域的多個相關學科。

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